产品货号：
JN0079
中文名称：
DNA拓扑异构酶I
英文名称：
DNA Topoisomerase I
产品规格：
50U|250U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是将TopA基因（E.coli）在大肠杆菌中进行表达后，经多次纯化分离而得到的。完整的DNA拓扑异构酶I（DNA Topoisomerase I）全酶是一分子量97kDa的蛋白。
DNA拓扑异构酶I催化4种反应：
- 催化负超螺旋DNA的松弛。
- 在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
- 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
- 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。
- 催化负超螺旋松弛；
- 识别错配；
- DNA的结构转换和解析。
25μL反应体系，在37℃条件下反应15分钟，能催化＞95%的0.5μg pUC19 RF I型（负超螺旋）DNA的解旋所需要的酶量定义为一个单位。DNA超螺旋化通过不含EB的琼脂糖凝胶电泳来检测。
| 组分 | 50U | 250U |
| DNA Topoisomerase I (5U/μL) | 10μL | 5×10μL |
| 10×TopoI Reaction Buffer | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃
1×DNA TopoI Reaction Buffer：
50mM KAc，20mM Tris-Ac，10mM MgAc2，100μg/mL BSA(pH7.9@25℃)。
1×TopoI Reaction Buffer，37℃温育。
65℃加热20分钟。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
pUC19 RF I型DNA用DNA拓扑异构酶I处理后进行琼脂糖凝胶电泳时，如果胶中含有EB染料，反应前后DNA条带位置不发生改变。这是由经过DNA拓扑异构酶I的作用转换为松弛型的DNA受EB影响，再次变为超螺旋状态造成的。因此使用DNA拓扑异构酶I作用后，先用不含EB染料的胶先进行电泳，再用EB染色。
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