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DNA拓扑异构酶I图片
产品货号:
JN0079
中文名称:
DNA拓扑异构酶I
英文名称:
DNA Topoisomerase I
产品规格:
50U|250U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是将TopA基因(E.coli)在大肠杆菌中进行表达后,经多次纯化分离而得到的。完整的DNA拓扑异构酶I(DNA Topoisomerase I)全酶是一分子量97kDa的蛋白。




DNA拓扑异构酶I催化4种反应:
  • 催化负超螺旋DNA的松弛。
  • 在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
  • 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
  • 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时,发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。



  • 催化负超螺旋松弛;
  • 识别错配;
  • DNA的结构转换和解析。



25μL反应体系,在37℃条件下反应15分钟,能催化>95%的0.5μg pUC19 RF I型(负超螺旋)DNA的解旋所需要的酶量定义为一个单位。DNA超螺旋化通过不含EB的琼脂糖凝胶电泳来检测。


组分50U250U
DNA Topoisomerase I (5U/μL)10μL5×10μL
10×TopoI Reaction Buffer1mL5×1mL

保存:-20℃


1×DNA TopoI Reaction Buffer:
50mM KAc,20mM Tris-Ac,10mM MgAc2,100μg/mL BSA(pH7.9@25℃)。


1×TopoI Reaction Buffer,37℃温育。


65℃加热20分钟。


经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。


pUC19 RF I型DNA用DNA拓扑异构酶I处理后进行琼脂糖凝胶电泳时,如果胶中含有EB染料,反应前后DNA条带位置不发生改变。这是由经过DNA拓扑异构酶I的作用转换为松弛型的DNA受EB影响,再次变为超螺旋状态造成的。因此使用DNA拓扑异构酶I作用后,先用不含EB染料的胶先进行电泳,再用EB染色。
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